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1.基本信息
品系名称：NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Vst/Vst
常用名：NPG小鼠
背景：NOD
毛色：白色
品系建立：
NPG小鼠，是北京维通达生物技术有限公司自主研发的一系列高度免疫缺陷大小鼠模型之一，将获得的Il2rg基因敲除小鼠，回交到NOD-scid背景建立的高度免疫缺陷模型。使用该小鼠模型已经发表了一系列高水平研究论文[1~6]。
2.制作简介
首先构建了Il2rg基因打靶载体，在B6/129 F1背景的ES细胞上，筛选得到将Il2rg基因敲除的阳性打靶细胞（见图1）。通过囊胚注射的方法，获得了Il2rg基因敲除的ES嵌合小鼠。然后，将ES打靶小鼠，与NOD-scid小鼠回交，从后代中选择Il2rg因基敲除鼠，再与NOD-scid小鼠回交。通过12代的回交，获得并选择Il2rg-雄鼠和Il2rg+/-雌鼠交配，获得PrkdcscidIl2rg-/-小鼠。随后，NOD.PrkdcscidIl2rg-/- 小鼠按照近交系的方式扩繁生产。
图1. Il2rg 基因打靶策略示意图
3.质控检测和表型分析
NPG小鼠主要包括两个基因突变，（1）Prkdc基因的点突变，在84号外显子上，TAT→TAA，产生了一个无效的包含83AA的删短蛋白；（2）Il2rg基因小鼠，3-8外显子的编码区被删除。NPG小鼠的SNP分析结果见表1，与NOD-scid (NOD.CB17- Prkdcscid/NcrCrlVr)小鼠一致。
NOD(non-obese diabetes) 背景适宜人源细胞移植[7]；Prkdc基因突变，小鼠T、B细胞缺失[8,9]；Il2rg蛋白的gamma链被敲除，其NK细胞活力几乎丧失[10,11]。因而其基因检测和表型分析主要集中在4个方面：①NOD背景（SNP检测）；②Prkdc点突变（PCR检测；T、B细胞缺失的流式检测）；③Il2rg敲除（PCR检测，功能性NK细胞缺失的流式检测）；④细胞移植重建分析。
（1）NOD背景检测
NPG小鼠制作使用的NOD-scid小鼠，其遗传检测数据见右上30个SNP(single nucleotide polymorphism)位点信息表，这些位点遗传标记分布于20条染色体。
表1. NPG 和NOD-scid 小鼠SNP分析结果。
SNP ID | Chr-cM | Allele | NPG | NOD-scid | |
1 | RS8253473-SNP1 | 1-80 | V=A, F=C | F F | F F |
2 | RS13476104-SNP1 | 1-128 | V=C, F=T | V V | V V |
3 | RS13476435-SNP1 | 2-35 | V=A, F=T | F F | F F |
4 | RS13476730-SNP1 | 2-119 | V=A, F=T | V V | V V |
5 | RS13477470-SNP1 | 3-146 | V=A, F=G | V V | V V |
6 | RS13478001-SNP1 | 4-135 | V=C, F=T | V V | V V |
7 | RS13478215-SNP1 | 5-42 | V=A, F=C | F F | F F |
8 | RS13459087-SNP1 | 5-86 | V=A, F=G | F F | F F |
9 | RS13478818-SNP1 | 6-73 | V=C, F=G | F F | F F |
10 | RS3710839-SNP1 | 6-121 | V=A, F=G | V V | V V |
11 | RS3666902-SNP1 | 7-15 | V=T, F=C | VV | VV |
12 | RS8260975-SNP1 | 7-34 | V=A, F=C | V V | V V |
13 | RS13479791-SNP1 | 8-60 | V=A, F=G | F F | F F |
14 | RS4227276-SNP1 | 8-80 | V=C, F=T | F F | F F |
15 | RS8254841-SNP1 | 9-38 | V=A, F=T | F F | F F |
16 | RS13480385-SNP1 | 9-103 | V=C, F=T | V V | V V |
17 | RS13480546-SNP1 | 10-24 | V=C, F=T | F F | F F |
18 | RS13480803-SNP1 | 10-123 | V=C, F=T | V V | V V |
19 | RS13480933-SNP1 | 11-25 | V=C, F=G | V V | V V |
20 | RS3653651-SNP1 | 11-102 | V=C, F=T | F F | F F |
21 | RS13481624-SNP1 | 12-99 | V=C, F=G | F F | F F |
22 | RS13481852-SNP1 | 13-63 | V=A, F=C | V V | V V |
23 | RS13482131-SNP1 | 14-30 | V=C, F=T | V V | V V |
24 | RS13459176-SNP1 | 15-3 | V=A, F=C | V V | V V |
25 | RS4170048-SNP1 | 16-32 | V=C, F=G | V V | V V |
26 | RS13482843-SNP1 | 17-4 | V=C, F=T | V V | V V |
27 | RS13483295-SNP1 | 18-35 | V=G, F=T | V V | V V |
28 | RS13483601-SNP1 | 19-34 | V=A, F=G | F F | F F |
29 | RS13483739-SNP1 | X-40 | V=C, F=T | V V | V V |
30 | RS13483962-SNP1 | X-109 | V=A, F=C | F F | F F |
Il2rg基因敲除鼠是维通达自主研发的，且NOD-scid小鼠来源与NOD-scid /LtSz（NSG）和 NOD-scid/Shi (NOG)均不同（源自中国的供应商，对其用途未作限制）。尽管，Il2rg基因敲除的策略与NSG该基因敲除的策略相似，但该专利在2015年到期 [5]。因此，NPG小鼠并不存在知识产权问题。
1.Efficient derivation of embryonic stem cells from NOD-scid Il2rg (-/-) mice.
Protein Cell. 2015 Dec;6(12):916-8. doi: 10.1007/s13238-015-0209-6.
2.Enhancement of the in vivo persistence and antitumor efficacy of CD19 chimeric antigen receptor T cells through the delivery of modified TERT mRNA.Cell Discov. 2015 Dec 8;1:15040. doi: 10.1038/celldisc.2015.40.
3.CRISPR-Cas9-mediated multiplex gene editing in CAR-T cells. Cell Res. 2017 Jan;27(1):154-157. doi: 10.1038/cr.2016.142. Epub 2016 Dec 2.
4.Derivation of Pluripotent Stem Cells with In Vivo Embryonic and Extraembryonic Potency.
Cell. 2017 Apr 6;169(2):243-257.e25. doi: 10.1016/j.cell.2017.02.005.
5.Transgenic murine model for XSCID. United States Patent 5912173. Filing Date:04/19/1995
