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转基因小鼠(Transgenic mouse creation)

  转基因是将外源DNA通过显微注射的方法注射到大(小)鼠受精卵的原核内,注射DNA整合到受精卵的基因组中,并遗传给后代。

维通达可以提供大小鼠传统的随机转基因和PB 转座子介导的转基因模型制作服务。通过原核注射,可以获得不同表达水平的Founder,每只Founder可能存在插入位点和拷贝数的不同,因而品系建立时需要单独对待。成功率与特定基因和小鼠品系相关。

动物品系

F1代小鼠常用的品系有B6D2F1B6SJLF1CD-1XFVBCD-1XC57BL/6等。杂种品系的优势是成功率高,繁殖力强,存活率高,可以较快的获得Founder。对于较难制作的转基因均采用F1代胚胎获得founder,然后再回交到需要的背景。

C57BL/6小鼠目前公布的小鼠基因组测序结果来源于C57BL/6小鼠品系。该品系小鼠模型已广泛应用于肿瘤、免疫、遗传学等方面的研究, 并已成为常用的标准品系之一。但转基因的效率相对较低,且C57BL/6生性好斗,易发生意外。

FVB小鼠原核大、清晰、近交品系,基因型比较单一;具有易于原核注射的优点。

SD大鼠常用的大鼠模型,适用于安全性评价、衰老、免疫和癌症等方面研究。

 

 1过表达转基因大(小)鼠

      构建上述常规的带有启动子和目的基因的表达载体, 利用原核显微注射的方法将表达载体注射到小鼠受精卵中。通过构建广泛性/组织特异性/诱导性等不同的启动子,实现转基因在小鼠组织广泛性/特异性/特定条件下等的表达,达到对目的基因功能的研究目的。

 2shRNA转基因大(小)鼠

     

通常采用U6/H1驱动shRNA表达,设计靶序列构建shRNA载体,利用原核显微注射的方法将shRNA载体注射到受精卵中。shRNA被加工成siRNA干扰沉默目的基因,实现基因功能的研究。

 3microRNA转基因大(小)鼠

      构建上述两种microRNA过表达和下调载体,通过原核显微注射将载体注射到受精卵中,通过基因表达,实现microRNA过表达或者下调。

 4)可诱导性/组织特异性转基因大(小)鼠

      将构建的广泛表达启动子-loxp-stop-loxp-转基因载体,通过显微注射制备组织特异性转基因大(小)鼠模型,转基因在正常情况下并不表达, 只有与相应的组织特异性表达Cre/CreERT2小鼠杂交后,因Stop终止序列在特定的组织中被去除,从而达到转基因在特定组织中/诱导性特异性表达的目的。

 5BAC转基因大(小)鼠

      Bacterial artificial chromosomesBACs)是以细菌F因子为基础构建的细菌克隆载体。由于其完整性和保真度,可以更好的表征体内转基因特征。因此,为了研究完整的时空特异性基因表达、基因结构及调控元件等,可以将BAC直接进行原核显微注射(约几十到几百Kb)或者将其改造后注射在小鼠或大鼠的受精卵中,以获得转基因鼠。

注意事项:

①每只F0代鼠基因型都不一样,不能进行F0之间的自交,只能先与野生型交配,筛选出基因型一致的F1。(假如F0代有多个位点的外源基因整合,F1还有可能有多种基因型)。

②获得F1鼠后,可以进行蛋白表达鉴定,优先筛选出表达的鼠后再进行后续的传代和保种。